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組織研磨均質(zhì)儀用于提取小鼠皮膚的DNA的具體步驟

更新時間:2021-11-18瀏覽:1716次
  組織研磨均質(zhì)儀是實(shí)驗室樣品制備常用工具,它通過碳化鎢小球或不銹鋼小珠在樣品管內(nèi)來回震蕩實(shí)現(xiàn)樣本的粉碎、混合、均化以及細(xì)胞破碎等,可以對硬性、軟性、彈性等樣品進(jìn)行快速的粉碎和均相化處理,符合理化分析實(shí)驗室的要求,配置不同體積、不同材料的研磨罐,可以進(jìn)行干磨、濕磨及冷凍研磨,也可以進(jìn)行細(xì)胞破碎和DNA/RNA提取,在農(nóng)業(yè)、生物醫(yī)藥、食品、質(zhì)檢、高校等各行各業(yè)都有廣泛的應(yīng)用。
 
  組織研磨均質(zhì)儀是實(shí)驗室常見的儀器,很多實(shí)驗人員知道組織研磨均質(zhì)儀可以用來研磨組織用來提取DNA,但是具體的實(shí)驗步驟卻摸不清頭腦,今天我就拿研磨儀通過小鼠皮膚提取DNA來做個示范,不懂實(shí)驗步驟的要拿筆好好記一下了。
 
  實(shí)驗步驟:
 
  1、在2ml圓底離心管單管放入小鼠皮膚樣品40-50mg;
 
  2、在離心管中加入5mm硬質(zhì)不銹鋼研磨珠1顆,蓋好管蓋,裝入鼎昊源TL1000自動研磨儀適配器中;
 
  3、將裝有樣品的適配器浸入液氮中;
 
  4、待液氮不沸騰后取出,迅速安裝上機(jī),采用間歇研磨方法;
 
  5、間歇研磨參數(shù)設(shè)置為轉(zhuǎn)速2000rpm,每次自動研磨1分鐘,間歇10s,循環(huán)4-5次效果好,從膠圖看RNA濃度較高;
 
  6、研磨結(jié)束后,將離心管取出,每管加入裂解液(Trizol)0.5ml,之后進(jìn)行離心、純化等,做后續(xù)RNA提取實(shí)驗。
 
  根據(jù)我的試驗經(jīng)驗,使用研磨儀研磨小鼠皮膚,參數(shù)設(shè)置轉(zhuǎn)速大于1600rpm,其他設(shè)置均采用以上案例中設(shè)定不變,都可以成功研磨并提取RNA。不過采用案例中的方法自動研磨效果好。

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