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光片顯微鏡怎樣獲取數(shù)據(jù)和調(diào)整樣品的方向?

更新時(shí)間:2021-10-13瀏覽:1261次
  光片顯微鏡的使用體驗(yàn)可能感覺與傳統(tǒng)顯微鏡特別不同,因?yàn)榇蠖鄶?shù)設(shè)置都是*數(shù)字化的,沒有目鏡,所以無法通過眼睛快速檢查樣品的位置和方向。此外,位移臺(tái)的控制可能與傳統(tǒng)顯微鏡的界面也有很大不同??焖賿呙铇悠氛麄€(gè)深度的能力,無需像共聚焦顯微鏡那樣等待掃描完成,使得光片顯微鏡的工作流程快速且直接。同樣,快速的數(shù)據(jù)獲取速度使得實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚩焖龠B續(xù)地進(jìn)行。然而,快速的數(shù)據(jù)獲取會(huì)導(dǎo)致大量數(shù)據(jù)迅速積累,用戶需在謹(jǐn)慎考慮數(shù)據(jù)存儲(chǔ)與數(shù)據(jù)處理能力的情況下方可進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間拍攝。
 
  在普通的寬場(chǎng)熒光顯微鏡中,安裝好的樣品被放置在顯微鏡臺(tái)上,然后從上面或下面(垂直或倒置)進(jìn)行照明和檢測(cè)。光片顯微鏡由于可以擁有不同的照明路徑,給樣品的放置增加了另一個(gè)自由度,從而允許用戶準(zhǔn)確定位樣品。此外,多組數(shù)據(jù)可以從不同的路徑獲得,并拼合在一起,也能使顯微鏡的穿透深度固定的情況下獲得更大的成像范圍。同時(shí),在光片顯微鏡中,樣品的放置方向也比經(jīng)典的單透鏡顯微鏡更為重要。用戶需要使樣品相對(duì)于照明軸和檢測(cè)軸方向正確:光片需要在不通過樣品的高折射或高吸收結(jié)構(gòu)的情況下到達(dá)感興趣的區(qū)域。
 
  與傳統(tǒng)熒光顯微技術(shù)不同的是,圖像采集過程中的第一個(gè)關(guān)鍵步驟是光片的校準(zhǔn)。在光片顯微鏡中,我們需要辨別調(diào)整光片的基本參數(shù),即高度和厚度,以及正確地將光片定位在檢測(cè)透鏡的焦平面上。這三個(gè)步驟對(duì)于獲得光片好的層析能力以及可靠性、一致性高的結(jié)果都是不可少的。此外,光片的校準(zhǔn)和對(duì)其參數(shù)的了解可能是決定進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)策略的關(guān)鍵性先決條件,例如調(diào)整軸向的步進(jìn)和之后的分析步驟。

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